Основа среды Левенштейна–Йенсена,500гр

Состав

* Дегидрированный порошок, гигроскопичный по природе, хранить в сухом защищенном от солнечного света месте в плотно закрытых контейнерах при 25°С.

Инструкция по применению

Растворите 37,24 г в 600 мл дистиллированной воды, содержащих 12 мл глицерола. Аккуратно нагревайте до полного растворения среды. Стерилизуйте в автоклаве при 15 psi (121°С) в течение 15 минут. Приготовьте 1000 мл эмульсии из цельного яйца, взятую асептически. И аккуратной смешайте яйцо с основой и добавкой Графта для микобактерий (ТS 047 при желании) для получения однородной смеси. Распределите по стерильным пробиркам с завинчивающимися крышками. Поместите пробирки в наклонное положение в водяную баню при температуре 85°С на 45 минут.

Внешний вид: Бледная голубовато-зелёная, непрозрачная культура на скошенном агаре

рН (при 25°С): 7.0 ± 0.2

Принцип

Основа среды Левенштейна–Йенсена используется для выделения и культивирования видов Mycobacterium. Основа питательной среды имеет сравнительно простой состав, поэтому требует использования добавок для поддержания роста микобактерий. Питательные среды на яичной основе содержат цельные яйца или желток, картофельный крахмал, соли и глицерол, они затвердевают путем уплотнения. Эти вещества являются источником жирных кислот и белков, необходимых для метаболизма микобактерий. Коагуляция яичного альбумина во время стерилизации обеспечивает твердость питательной среды для целей инокуляции. Йенсен изменил среду Левенштейна путем изменения содержания цитрата и фосфата, исключив краситель конго красный и увеличив концентрацию малахитового зеленого. Графт позднее изменил среду Левенштейна–Йенсена путем добавления противомикробных агентов для увеличения селективности. Пенициллин и налидиксовая кислота вместе с Малахитовым зеленым предотвращает рост большинства контаминантов, сохранившихся при дезактивации образца при одновременном стимулировании роста Mycobacteria. Не добавляйте глицерол в питательную среду, если культивируются бычьи или другие глицеролфобные штаммы. Малахитовый зеленый служит в качестве ингибитора, а также как индикатор рН. Образование голубой зоны указывает на снижение значения рН при грам-положительных контаминантах (например, Streptococci) и желтых зон разрушения красителя при грам-отрицательных бациллах. Обычно культивирование выполняется в аэробных условиях при 35°С.

1. Скошенный агар и бутыли со средой Левенштейна–Йенсена:
2. Посев образцов с культурой
3. Используя стерильные одноразовые 0,01 мл калиброванные петли, засейте скошенный агар или бутыли с помощью микобактериальных культур, приготовленных, как описано в инструкции по применению.

Держите культуры в вертикальном положении в течение 5 минут при комнатной температуре.

1. Измерьте (в мм) высоту колонки пузырьков над поверхностью питательной среды.
2. Инкубируйте пробирки с ослабленными крышками при 35 ± 2°С в аэробных условиях дополненных углекислым газом.
3. Осмотр пробирок или бутылей проводится после 7, 14 и 21 дня на предмет роста, селективности и пигментации.
4. Засейте поверхность столбика агара с помощью стерильной одноразовой 0,01 мл петли для посева используя культуры приготовленные как описано выше.
5. Инкубируйте пробирки с ослабленными крышками при 35 ± 2°С в аэробных условиях дополненных углекислым газом.
6. После 14 дней инкубации, к каждой культуре добавьте 1,0 мл смеси Полисорбат 80 - перекись водорода.

Для приготовления: 10% раствор Полисорбата 80 готовится следующим образом:

** Смешайте 10 мл Полисорбата 80 с 90 мл очищенной воды. Автоклавируйте при 121°С в течение 10 минут.

** 30% раствор перекиси водорода. Хранить в холодильнике.