Среда Кларка (Глюкозо-фосфатный буферный бульон), 500гр

Состав

*Дегидратированный порошок, гигроскопический по характеру, хранить в сухом месте, в плотно закупоренных контейнерах при температуре 25°C и защитить от воздействия прямых солнечных лучей.

Указания по использованию

Растворите 17 г в 1000 мл дистиллированной воды. Осторожно нагревайте до полного растворения среды. Распределите по 10 мл в каждую пробирку и автоклавируйте при 15 psi (при 121°C) в течение 15 минут. Перед использованием охладите до комнатной температуры.

Внешний вид: Светло-желтый цвет, прозрачный

pH(при 25ºC): 6,9 ± 0,2

Принцип

ЗАБУФЕРЕННЫЙ БУЛЬОН С ГЛЮКОЗОЙ (MR – VP СРЕДА) используется для дифференциации семейства кишечно-аэрогенных бактерий, которые можно разделить на две группы на основе их действия в пептонной и декстрозной среде. Пробы MR и VP появляются в схеме идентификации Enterobacteriaceae, важные изоляты в клинической микробиологии и микробиологическом испытании пищевых и молочных продуктов. Бульон MR-VP также известен как Среда метилового кратного Фогес-Проскауэра. Панкреатический гидролизат казеина и Пептический перевар животной ткани являются источником углерода, азота в бульоне MR-VP. Декстроза является сбраживаемым углеводом. Монокалийортофосфат является буферным веществом.

При анализе с использованием индикатора pH метила красного, группа «coli» давала высокую кислотность, а группа «aerogenes» давала менее кислую реакцию. Анализ на обнаружение высоко кислотных конечных продуктов известен как проба с метиловым красным (MR). Цветная реакция возникает, когда определенные культуры, инкубированные в среде, содержащей пептон и декстрозу, обрабатывают гидроксидом калия и подвергают контакту с воздухом.

Приготовленный бульон – прозрачный и имеет светло-желтый цвет. Приготовление индикаторного раствора метила красного: Растворите 0,04 г метила красного в 60 мл абсолютного спирта; скорректируйте pH до значения 5,0. Раствор приобретет оранжевый цвет. Приготовление реагента O'MEARA: Растворите 40 г гидроксида калия в 100 мл дистиллированной воды. Дайте ему остыть, добавьте 0,3 г креатина (моногидрата) и растворите. Приготовленный раствор реагента можно хранить в течение примерно 4 недель в холодильнике (+4ºC). Приготовление раствора сульфата меди в соотв. с LEIFSON: Растворите 1 г сульфата меди в 40 мл концентрированного аммиака и добавьте 690 мл 10% раствора гидроксида калия (приготовленного из гидроксида калия). Приготовление реагента BARRITT: Растворите 5 г нафтола в 100 мл абсолютного спирта.

Процедура испытания

Инокулируйте бульон MR-VP с ростом от одной колонии. Инкубируйте при 35 - 37°C в течение 48 часов. Приступите к пробе с метиловым красным или пробе Фогеса-Проскауэра.

Проба с метиловым красным

Поместите 2 мл культуры бульона MR-VP в пробирку (13 x 100 мм). Добавьте 5-10 капель метилового красного и наблюдайте изменение цвета.

Проба Фогеса-Проскауэра

Поместите 5 мл культуры бульона MR-VP в пробирку (13 x 100 мм). Добавьте 3 мл реагента Фогеса-Проскауэра a (5% α-нафтол). Добавьте 1 мл реагента Фогеса-Проскауэра B (40% KOH). Осторожно взболтайте пробирку и оставьте на 2 – 5 минут. Наблюдайте изменение цвета.

ПРИМЕЧАНИЕ: Если анализ отрицательный, продолжите инкубировать бульон без добавления реагентов, повторите анализ после дополнительных 18 – 24 часов инкубации.