Рибонуклеаза А (РНКаза А), 50мг/Molecular Biology Grade

Рибонуклеаза А (РНКаза А) представляет собой эндорибонуклеазу, которая специфически расщепляет одноцепочечную РНК 3 'до пиримидиновых остатков (цитозин, урацил). Таким образом, он генерирует пиримидин-3'-фосфат или олигонуклеотиды с концевыми пиримидин-3'-фосфатами. Оптимальное значение pH находится в диапазоне 7,0-7,5. РНКаза А используется для очистки ДНК, свободной от РНК, для удаления негибридизованных областей РНК: ДНК-гибридов или в качестве маркера молекулярной массы. Фермент ингибируется диэтилопирокарбонатом (DEPC), солями гуанидиния (4 M GuaSCN), β-меркаптоэтанолом, тяжелыми металлами, ванадил-рибонуклеозид-комплексами, ингибитором РНКазы из плаценты человека. Что касается последнего, то эффект денатурированной ДНК выше, чем нативные нуклеиновые кислоты.

Тем не менее, РНКаза А очень активна в очень разных условиях и ее трудно инактивировать. При низких концентрациях соли (до 100 мМ NaCl) РНКаза А расщепляет одно- и двухцепочечную РНК и РНК в РНК: ДНК-гибриды. При высоких концентрациях солей (>300 мМ NaCl) расщепляется только одноцепочечная РНК.

Чтобы удалить фермент из образцов, его нужно переваривать протеиназой K (часто добавляют SDS при конечной концентрации 0,6%) и требуется несколько экстрактов фенола.

Исходные растворы готовят при концентрациях от 1 до 10 мг / мл в 10 мМ Трис · HCl, pH 7,5; 15 мМ NaCl или в 10 мМ Трис · HCl, pH 7,5; 1 мМ ЭДТА, pH 8,0 (буфер TE).

Рекомендуемая рабочая концентрация составляет 10 мкг / мл (удаление РНК из плазмидных препаратов, 1 час, RT) или 100 нг / мл (подготовка «тупых концов» двухцепочечной кДНК).