Tth полимераза, 5 ед./мкл 500 ед.

Tth полимераза является термостабильным ферментом массой прибл. 94кДа. Источник происхождения этого фермента Thermus thermophilus. Максимальная активность фермента проявляется при темп. 70-74 °С (хотя фермент может работать и при более низких температурах от 25 °С), время полужизни при 94 °С составляет прибл. 25 мин. Фермент осуществляет синтез ДНК в направлении 5'->3' в присутствии ионов Mg²⁺ и при соответствующем значении рН, а также синтез ДНК в направлении 5'->3' в присутствии ионов Mn₂, используя в качестве матрицы РНК. Tth полимераза также обладает 5'->3' экзонуклеазной активностью (эта активность проявляется только при работе фермента на двухцепочечной ДНК). Наличие 5'->3' экзонуклеазной активности делает фермент пригодным для использования его в ПЦР в реальном времени. Способность Tth полимеразы образовывать цепь ДНК на матрице РНК позволяет использовать этот фермент в реакциях синтеза кДНК. Хотя транскриптазная активность выражена у данного фермента не так сильно, как у M-MLV и AMV транскриптаз, используя Tth полимеразу можно получать транскрипты в среднем до 800 п.н., что позволяет использовать этот фермент в реакциях совмещенной обратной транскрипции (ОТ) и ПЦР. Амплификаты, полученные с использованием Tth полимеразы, могут иметь на концах выступающую букву A. Это не мешает клонированию. При необходимости получать амплификаты без выступающей буквы мы рекомендуем использовать Pfu или LR полимеразы. Максимальная длина амплификата, которую можно получить с использованием Tth полимеразы, прибл. 5'000 п.н.

Хранение: - 20 °C

Состав буфера

Буфер без Mg²⁺ (x10):

700 mM Трис-HCl, pH 8.6 / 25°C, 166 mM (NH₄)₂SO₄

Применение

проведение ПЦР

проведение ОТ ПЦР

мечение ДНК различными меченными нуклеотидами (радиоактивными и нерадиоактивными)

секвенирование ДНК