Кумасси бриллиантовый голубой R-250 (C.I. 42660), 25гр

Кумасси бриллиантовый голубой является одним из наиболее часто используемых красителей для белков после их отделения электрофорезом полиакриламидного геля. Комплекс белка-красителя имеет максимум поглощения при 549 нм, краситель без белка при 555 нм (в 0,01 М цитратном буфере, рН 3). Интенсивность окрашивания белков, вероятно, зависит от основности белка. По положительно заряженной аминокислоте будут связаны приблизительно 1,5-3 молекулы Кумасси. Этот вариант усложняет точное определение белка с альбумином в качестве стандарта, поскольку этот белок содержит более основные аминокислоты, чем многие другие белки.

Существует много протоколов для чувствительных процедур окрашивания с Кумасси. Чувствительность достигает предела при 25 нг белка. Мы рекомендуем следующий протокол:

1. Окрашивающий раствор: 0,1% Кумасси бриллиантовый голубой R-250,

20% метанола (или этанола), 10% уксусной кислоты

Гель SDS (без «штабелирующего геля») окрашивается в течение 1 часа при 60 °C или в течение 2 часов при 50 °C или в ночное время при комнатной температуре.

1. Конечный раствор: 20% метанол (или этанол), 10% уксусная кислота. Обесцвечивается гель в течение 3 - 4 часов при температуре 50-60 °C. Добавьте несколько тампонов. Затем промойте гель около 15 минут в воде и высушите под вакуумом при 60 °C в течение 2 - 3 часов.